ECP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404327
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ECP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ECP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ECP Anticuerpo (C3): sc-517595
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ECP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404327 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RNASE3 codifica la proteína catiónica del eosinófilo (ECP), una ribonucleasa asociada a los gránulos que liberan los eosinófilos activados durante las respuestas inmunitarias. La ECP presenta actividades antimicrobianas y citotóxicas y contribuye a la remodelación tisular mediada por eosinófilos mediante interacciones con las membranas celulares, componentes de la matriz extracelular y la señalización de la inmunidad innata. La expresión de RNASE3 y la desgranulación se asocian a la inflamación de tipo 2 y a respuestas eosinofílicas que moldean la biología de las mucosas de las vías respiratorias, la piel y el tracto gastrointestinal. Los niveles desregulados de ECP se utilizan con frecuencia como lectura molecular de la activación de eosinófilos en la investigación de enfermedades inflamatorias, incluido el asma y otros trastornos alérgicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ECP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RNASE3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RNASE3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RNASE3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ECP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RNASE3 para la investigación de la señalización de ECP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RNASE3 críticos para la función de ECP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RNASE3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ECP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ECP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RNASE3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ECP (h) y el plásmido HDR ECP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RNASE3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RNASE3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.