ECHS1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406053

Descripción general

ECHS1 codifica la enoil‑CoA hidratasa 1 de cadena corta, una enzima de la matriz mitocondrial de la espiral de β‑oxidación de ácidos grasos que cataliza la hidratación de intermediarios trans‑2‑enoil‑CoA de cadena corta. A través de su papel en el metabolismo energético, ECHS1 contribuye a la producción mitocondrial de acetil‑CoA e interactúa con vías que mantienen el equilibrio redox y la fosforilación oxidativa en condiciones de estrés por limitación de nutrientes. La alteración de la función de ECHS1 interrumpe la utilización mitocondrial de sustratos y se asocia con errores congénitos del metabolismo caracterizados por acidosis láctica y fenotipos neurodegenerativos. En modelos celulares, ECHS1 se estudia habitualmente por su impacto en la bioenergética mitocondrial, el flujo de metabolitos y la señalización sensible al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ECHS1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ECHS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ECHS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ECHS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ECHS1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ECHS1 para la investigación de la señalización de ECHS1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ECHS1 críticos para la función de ECHS1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ECHS1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ECHS1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ECHS1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ECHS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ECHS1 (h) y el plásmido HDR ECHS1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ECHS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ECHS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.