Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
EAAT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422984
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- EAAT2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico EAAT2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EAAT2 Anticuerpo (E-1): sc-365634
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
EAAT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422984 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Slc1a2 codifica el transportador de aminoácidos excitadores 2 (EAAT2), un transportador de glutamato de alta capacidad dependiente de Na+ que se expresa predominantemente en astrocitos y elimina el glutamato sináptico para mantener la neurotransmisión excitadora y prevenir el estrés excitotóxico. EAAT2 modula la señalización glutamatérgica al acoplar la captación de glutamato a los gradientes iónicos y al favorecer el acoplamiento metabólico astrocito–neurona mediante el ciclo glutamato–glutamina. A través de la regulación de la homeostasis del glutamato extracelular, Slc1a2 influye en la plasticidad sináptica, la supervivencia neuronal y la excitabilidad de las redes. Las alteraciones en la función o la expresión de EAAT2 se han relacionado con mecanismos relevantes para la neurodegeneración, la epilepsia y la neuroinflamación, lo que convierte a Slc1a2 en un objetivo frecuente en estudios de vías del SNC.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO EAAT2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc1a2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc1a2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc1a2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EAAT2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc1a2 para la investigación de la señalización de EAAT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Slc1a2 críticos para la función de EAAT2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc1a2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido EAAT2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EAAT2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc1a2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EAAT2 (m) y el plásmido HDR EAAT2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc1a2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc1a2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.