E-cadherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (canine): sc-437341

Panoramica

L’E-caderina (CDH1) è una glicoproteina di adesione cellula–cellula dipendente dal calcio che media la formazione delle giunzioni aderenti e l’integrità dei tessuti epiteliali nelle cellule canine. Attraverso la sua associazione citoplasmatica con le catenine, l’E-caderina si collega al citoscheletro di actina e regola la polarità epiteliale, l’inibizione da contatto e la funzione di barriera. La perdita o la deregolazione dell’E-caderina altera la segnalazione a livello giunzionale e può promuovere programmi di transizione epitelio-mesenchimale (EMT), con effetti a valle sulla via di segnalazione Wnt/β-catenina e su fenotipi legati a migrazione e invasione. L’alterazione dell’espressione di E-caderina e dell’architettura delle giunzioni è comunemente studiata nel contesto della progressione tumorale, della fibrosi e del rimodellamento infiammatorio nei tessuti epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO E-cadherin (canine) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari canine. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina E-cadherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di E-cadherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di E-cadherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal E-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (canine) e dal E-cadherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (canine2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal E-cadherin Plasmide HDR (canine) e il plasmide HDR E-cadherin (canine2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.