Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420082-NIC

O gene Dvl3 de camundongo codifica a Dishevelled 3 (Dvl-3), uma fosfoproteína citoplasmática que atua como um andaime central na sinalização Wnt. A Dvl-3 transmite sinais dos receptores Frizzled para efetores a jusante tanto na transcrição canônica dependente de β-catenina quanto nas vias não canônicas de polaridade celular planar e Wnt/Ca²⁺, influenciando a polaridade celular, a migração e a remodelação do citoesqueleto. Por meio dessas redes, a DVL3 contribui para o padrão embrionário e para a homeostase tecidual, e a desregulação da sinalização Wnt–Dishevelled é frequentemente implicada em sinalização oncogênica, defeitos do desenvolvimento e remodelamento associado à fibrose. Assim, a perturbação de Dvl3 é amplamente utilizada para investigar o crosstalk das vias com GSK3β/β-catenina, a sinalização por JNK e a dinâmica de actina mediada por pequenas GTPases.

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Dvl3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Dvl3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Dvl3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Dvl3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.