DUOX2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403534

Panoramica

DUOX2 (dual oxidase 2) codifica una NADPH ossidasi associata alla membrana che genera perossido di idrogeno sulla superficie apicale delle cellule epiteliali, fornendo il substrato per reazioni mediate da perossidasi e per la segnalazione redox-dipendente. Nell’ambito della difesa innata mucosale, l’attività di DUOX2 è integrata con la segnalazione del calcio, con le risposte JAK/STAT guidate dalle citochine e con le vie dello stress ossidativo che modellano la funzione di barriera e i programmi antimicrobici. Un’espressione o attività disregolata di DUOX2 è stata collegata alla suscettibilità alla malattia infiammatoria intestinale, all’infiammazione mucosale cronica e ad alterate interazioni ospite–microbioma; inoltre è studiata nel contesto dell’ormonogenesi tiroidea e della carcinogenesi epiteliale. Poiché le specie reattive dell’ossigeno (ROS) derivate da DUOX2 possono modulare la segnalazione MAPK e NF-κB, DUOX2 è spesso analizzato per i suoi effetti su proliferazione, differenziamento e risposte al danno del DNA in modelli epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DUOX2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUOX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUOX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUOX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DUOX2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUOX2 per lo studio della segnalazione di DUOX2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DUOX2 critici per la funzione di DUOX2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUOX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DUOX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DUOX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUOX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DUOX2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DUOX2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUOX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUOX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.