DUOX1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430265

Descripción general

Duox1 codifica la doble oxidasa 1 (DUOX1), una enzima de la familia de las oxidasa NADPH que genera peróxido de hidrógeno en la superficie celular y dentro de las vías secretoras. En epitelios y tejidos mucosos de ratón, las especies reactivas de oxígeno derivadas de DUOX1 contribuyen a la señalización redox, a la defensa innata del huésped y a la regulación de procesos como la reparación de heridas y las respuestas inflamatorias. La actividad de DUOX1 se integra con la señalización dependiente de calcio e influye en vías posteriores sensibles a señales oxidativas, incluidos programas transcripcionales asociados a MAPK y NF-κB. La producción desregulada de ROS mediada por DUOX1 se ha implicado en modelos de inflamación de las vías respiratorias, disfunción de la barrera epitelial y biología del estrés oxidativo relevante para mecanismos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DUOX1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Duox1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Duox1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Duox1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DUOX1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Duox1 para la investigación de la señalización de DUOX1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Duox1 críticos para la función de DUOX1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Duox1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DUOX1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DUOX1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Duox1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DUOX1 (m) y el plásmido HDR DUOX1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Duox1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Duox1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.