Dorfin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406860

Descripción general

RNF19A codifica Dorfin, una ligasa E3 de ubiquitina de la familia RBR implicada en el control de calidad de proteínas dependiente de ubiquitina y en la proteostasis. Dorfin participa en el reconocimiento y la ubiquitinación de sustratos mal plegados o propensos a agregarse, conectando las respuestas al estrés del retículo endoplásmico y las vías de degradación citosólicas para mantener la homeostasis celular. A través de la regulación de la señalización de ubiquitina y del recambio de proteínas neuronales y asociadas al estrés, RNF19A se ha estudiado en el contexto de la neurodegeneración y de otras afecciones caracterizadas por la agregación proteica y una proteostasis desregulada. Su actividad converge con vías que gobiernan la degradación asociada al RE (ERAD), la eliminación relacionada con la autofagia y redes de señalización inducidas por estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dorfin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RNF19A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RNF19A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RNF19A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dorfin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RNF19A para la investigación de la señalización de Dorfin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RNF19A críticos para la función de Dorfin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RNF19A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dorfin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dorfin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RNF19A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dorfin (h) y el plásmido HDR Dorfin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RNF19A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RNF19A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.