Dnmt3L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424871

Descripción general

Dnmt3l codifica Dnmt3L, un cofactor catalíticamente inactivo que estimula a las metiltransferasas de ADN de novo DNMT3A y DNMT3B para establecer y mantener los patrones de metilación del ADN durante el desarrollo. En el ratón, Dnmt3L es muy relevante para la programación epigenética de la línea germinal, donde favorece la metilación de retrotransposones y de regiones de control de impronta, contribuyendo a la estabilidad del genoma y a la regulación génica específica según el progenitor de origen. A través de estas funciones, Dnmt3L se integra en vías de regulación epigenética que coordinan el estado de la cromatina, el silenciamiento transcripcional y la reprogramación asociada a la meiosis. La desregulación de los procesos de metilación asociados a DNMT3L se vincula con defectos de impronta, una represión alterada de transposones y una inestabilidad más amplia del epigenoma que puede influir en fenotipos del desarrollo y en estados epigenéticos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dnmt3L (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dnmt3l en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dnmt3l junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dnmt3l tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dnmt3L.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dnmt3l para la investigación de la señalización de Dnmt3L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dnmt3l críticos para la función de Dnmt3L
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dnmt3l para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dnmt3L CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Dnmt3L CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dnmt3l. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dnmt3L (m) y el plásmido HDR Dnmt3L (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dnmt3l para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dnmt3l definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.