DNase I CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402467-ACT

ヒトDNASE1は、分泌型エンドヌクレアーゼであるDNase Iをコードしており、細胞外DNAを加水分解して、細胞の入れ替わりや組織リモデリングの過程における核酸のクリアランスに寄与する。DNase Iは、アポトーシスまたはネクローシス細胞から放出されたクロマチンを分解することで、自然免疫の核酸センシング経路を活性化し得る免疫刺激性DNAの残存を抑え、炎症シグナルの調節に関与する。DNASE1活性はまた、好中球細胞外トラップ（NET）の代謝回転や、DNAに富む細胞外マトリックスの解消にも関連しており、血栓症に伴う炎症やバリア組織の恒常性維持といったプロセスとも結び付く。DNASE1の発現または機能の変化は、DNAクリアランスの破綻や自己免疫様表現型と関連していることが報告されており、自己DNAに対する寛容の機構や炎症性病態を研究する上で有用な標的となる。

DNase I CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNASE1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DNase I CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNASE1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNASE1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DNase Iの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNASE1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDNase I依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNASE1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDNase I経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。