Plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJA4 (h): sc-406743

Présentation

DNAJA4 code pour DnaJA4, un membre de la famille des co‑chaperons Hsp40 (DnaJ) qui se lie aux protéines clientes non repliées et stimule l’activité ATPase de Hsp70 afin de favoriser le repliement correct, le repliement après dénaturation et l’orientation des protéines mal repliées. Grâce à ces processus de contrôle qualité pilotés par les chaperons, DnaJA4 contribue aux réseaux de protéostasie, à l’interface des réponses cellulaires au stress et des voies de renouvellement des protéines. Une activité des chaperons dérégulée peut influencer la stabilité et la fonction des protéines de signalisation, avec un impact sur les voies qui gouvernent la survie cellulaire, la différenciation et l’adaptation au stress. Une capacité de protéostasie altérée est largement pertinente en biologie des maladies, notamment dans des contextes où un repliement aberrant des protéines, leur agrégation ou une signalisation de stress favorisent des phénotypes pathologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJA4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNAJA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNAJA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNAJA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DnaJA4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNAJA4 pour l'étude de la signalisation de DnaJA4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNAJA4 essentiels à la fonction de DnaJA4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNAJA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DnaJA4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DnaJA4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNAJA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DnaJA4 plasmide HDR (h) et le DnaJA4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNAJA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNAJA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.