Plásmido Doble Nickase (h) DNA Ligase III: sc-402841-NIC

LIG3 codifica la ligasa III del ADN humana, una ligasa dependiente de ATP que sella roturas de cadena sencilla durante la reparación por escisión de bases y coordina la reparación del daño oxidativo del ADN mediante interacciones con XRCC1. La ligasa III del ADN también contribuye a la unión alternativa de extremos y participa en procesos de mantenimiento del genoma que protegen las horquillas de replicación y preservan la estabilidad cromosómica. Su isoforma mitocondrial respalda la reparación y la integridad del ADN mitocondrial, vinculando la función de LIG3 con la bioenergética celular y las respuestas al estrés. La desregulación o pérdida de la actividad de LIG3 se asocia con un aumento de la señalización de daño en el ADN, una mayor carga mutacional y fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y la investigación sobre neurodegeneración.

DNA Ligase III El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LIG3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LIG3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LIG3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LIG3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.