Dmp1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402941-ACT

ヒトDMTF1は、サイクリンD結合性転写因子Dmp1をコードしており、細胞周期の進行や分化を制御する腫瘍抑制因子関連の調節因子である。Dmp1は、増殖刺激（ミトジェン）に由来するシグナルをチェックポイント経路の転写制御と統合し、とりわけARF–MDM2–TP53軸の活性化およびRB/E2F依存性プログラムの調節を通じて機能する。老化、アポトーシス、増殖抑制に影響を及ぼすことで、DMTF1はがん遺伝子シグナルに対する応答としてゲノム安定性の維持に寄与する。DMTF1の発現や機能の変化は、複数のがん関連状況における増殖制御の破綻と関連付けられており、ストレス応答や細胞運命決定を研究する上で有用な解析ノードとなる。

Dmp1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DMTF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dmp1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DMTF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDMTF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dmp1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDMTF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDmp1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDMTF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDmp1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。