Partículas Lentivirales de Activación (h) DMBT1: sc-402615-LAC

DMBT1 (deleted in malignant brain tumors 1) codifica una glicoproteína secretada rica en cisteínas, tipo receptor “scavenger”, implicada en la diferenciación epitelial, la defensa inmunitaria innata y la homeostasis de la barrera mucosa. La proteína DMBT1 puede unirse a diversos ligandos microbianos y endógenos, favoreciendo la aglutinación, el reconocimiento de patrones y la modulación de la señalización inflamatoria en las superficies tisulares. Se asocia con procesos como las interacciones con la matriz extracelular, la reparación de heridas y la regulación de la adhesión y la polaridad celular, con efectos dependientes del contexto sobre los programas de crecimiento epitelial. Se han descrito alteraciones en la expresión de DMBT1 o disrupciones en su locus en varios cánceres de origen epitelial y en afecciones inflamatorias, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar las interfaces huésped–microbio y las respuestas epiteliales al estrés.

Las partículas de activación lentiviral DMBT1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DMBT1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DMBT1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DMBT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DMBT1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DMBT1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.