Plasmide Double Nickase (h) DMBT1: sc-402615-NIC

DMBT1 (deleted in malignant brain tumors 1) code une glycoprotéine sécrétée, multidomaine, de type récepteur « scavenger » riche en cystéines, impliquée dans la défense de l’hôte au niveau épithélial et l’homéostasie des muqueuses. La protéine participe à la reconnaissance de motifs, à l’agglutination des microbes et à la modulation des signaux inflammatoires, et des rôles lui ont été attribués dans la différenciation épithéliale et les processus associés à la barrière. L’expression de DMBT1 est régulée en réponse aux lésions tissulaires et aux stimuli immunitaires, et a été reliée à des voies impliquant l’immunité innée, les interactions avec la matrice extracellulaire et l’adhérence cellule–cellule. Une expression altérée de DMBT1 ou une perte génomique a été associée à diverses pathologies épithéliales et à la biologie tumorale, ce qui soutient son intérêt en tant que cible de recherche dans l’inflammation, la biologie des infections et les mécanismes liés au cancer.

DMBT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DMBT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DMBT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DMBT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DMBT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.