Plasmide CRISPR/Cas9 KO DISP2 (m): sc-431923

Présentation

Le membre 2 de la famille des transporteurs RND Dispatched (DISP2), codé par le gène murin *Disp2*, est une protéine membranaire multipasse apparentée à la famille Dispatched, impliquée dans la libération et la distribution extracellulaire des ligands Hedgehog modifiés par des lipides. En modulant la disponibilité du morphogène Hedgehog, DISP2 est susceptible d’influencer les programmes de mise en place des patrons de développement, la signalisation épithélio-mésenchymateuse et l’homéostasie tissulaire régies par l’activité de la voie Hedgehog. Des dynamiques de signalisation Hedgehog altérées sont pertinentes dans l’étude des anomalies congénitales du développement et de la reprogrammation de la signalisation associée au cancer, faisant de *Disp2* un point d’entrée utile pour disséquer la régulation de cette voie. Dans des modèles murins, la perturbation de *Disp2* peut être exploitée pour étudier comment les processus de transport membranaire façonnent les gradients de signalisation paracrine et les réponses transcriptionnelles en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DISP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Disp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Disp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Disp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DISP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Disp2 pour l'étude de la signalisation de DISP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Disp2 essentiels à la fonction de DISP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Disp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DISP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DISP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Disp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DISP2 plasmide HDR (m) et le DISP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Disp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Disp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.