Plásmido Doble Nickase (h) DENND4B: sc-411384-NIC

DENND4B codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que contiene un dominio DENN y regula pequeñas GTPasas de la familia Rab, apoyando el tráfico de membranas y el reciclaje endosomal. Mediante la modulación de los estados de activación de Rab, DENND4B contribuye a la dinámica de anclaje y fusión de vesículas, lo que influye en el recambio de receptores, la localización de transportadores de nutrientes y la salida de señalización desde compartimentos del sistema endomembranoso. Estas funciones de tráfico se intersecan con vías que controlan la organización del citoesqueleto, la polaridad celular y las respuestas adaptativas al estrés, lo que convierte a DENND4B en un nodo relevante en estudios de migración celular y atenuación de señales. La regulación alterada de los programas de transporte endosomal vinculados a DENND4B se ha investigado en contextos de enfermedad en los que el tráfico de membranas y la señalización de receptores están desregulados, incluido el remodelado celular asociado al cáncer.

DENND4B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DENND4B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DENND4B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DENND4B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DENND4B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.