Plásmido Doble Nickase (h) Decorin: sc-400786-NIC

DCN codifica decorina, un pequeño proteoglucano secretado rico en leucina que organiza la arquitectura de la matriz extracelular al unirse a colágenos y modular el ensamblaje de las fibrillas. La decorina también regula la señalización de factores de crecimiento, incluido TGF-β, e influye en la transcripción dependiente de SMAD, la adhesión celular y los programas migratorios que moldean la remodelación tisular. A través de estas interacciones extracelulares, DCN afecta la activación de fibroblastos, el equilibrio angiogénico y la comunicación cruzada inflamatoria dentro de los microambientes estromales. La expresión alterada de DCN o la composición del proteoglucano decorina se asocia con fibrosis, reparación deficiente de heridas y dinámicas tumor–estroma, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la señalización de la matriz.

Decorin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DCN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DCN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DCN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DCN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.