DDX30 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411632-LAC

DHX30 codifica DDX30, un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAD-box implicata nel rimodellamento ATP-dipendente delle strutture dell’RNA e dei complessi ribonucleoproteici. DDX30 contribuisce alla regolazione genica post-trascrizionale, inclusi il processamento dell’RNA e il controllo associato alla traduzione, ed è stata collegata al metabolismo dell’RNA mitocondriale e ai programmi di risposta allo stress cellulare. Attraverso queste funzioni, l’attività di DHX30 può influenzare la proteostasi, l’omeostasi metabolica e gli output della segnalazione dell’immunità innata che dipendono dal sensing dell’RNA e da un’espressione genica regolata. La disregolazione o la variabilità genetica di DHX30 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e a perturbazioni più ampie della trascrizione e della traduzione rilevanti per la modellizzazione di malattie in cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX30 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DHX30 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale DDX30 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DHX30, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di DDX30. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DHX30 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.