DDIT3/GADD153/CHOP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419970

Descripción general

El gen murino Ddit3 codifica DDIT3 (también conocido como GADD153/CHOP), un factor de transcripción bZIP inducible por estrés que forma heterodímeros con miembros de la familia C/EBP para reprogramar la expresión génica durante el estrés celular. Es un efector central de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) aguas abajo de la señalización PERK–eIF2α–ATF4 e integra el estrés del retículo endoplásmico con vías de estrés oxidativo, privación de nutrientes y daño del ADN. DDIT3 regula la apoptosis, la autofagia y el control del ciclo celular, influyendo en la integridad mitocondrial y en programas transcripcionales que determinan el destino celular. La alteración de la actividad de DDIT3 se ha implicado en fenotipos inflamatorios y metabólicos, y se utiliza ampliamente como lectura mecanística en modelos de neurodegeneración, estrés de células β relacionado con la diabetes y adaptación al estrés del microambiente tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDIT3/GADD153/CHOP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ddit3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ddit3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ddit3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDIT3/GADD153/CHOP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ddit3 para la investigación de la señalización de DDIT3/GADD153/CHOP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ddit3 críticos para la función de DDIT3/GADD153/CHOP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ddit3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ddit3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDIT3/GADD153/CHOP (m) y el plásmido HDR DDIT3/GADD153/CHOP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ddit3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ddit3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.