DDAH I Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402719

Panoramica

DDAH1 codifica la dimetilarginina dimetilaminoidrolasi 1 (DDAH I), un enzima citosolico che idrolizza la dimetilarginina asimmetrica (ADMA) e altre metilarginine correlate, modulando così l’attività della sintasi dell’ossido nitrico e la biodisponibilità cellulare di ossido nitrico (NO). Attraverso la regolazione dell’asse ADMA–NO, DDAH I influenza la funzione endoteliale, l’equilibrio redox, il tono vascolare e le vie di segnalazione infiammatorie. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DDAH1 sono state associate a fenotipi cardiovascolari e metabolici e vengono spesso analizzate in contesti di disfunzione endoteliale e stress ossidativo. DDAH1 è inoltre studiato in biologia tumorale e nel rimodellamento tissutale, dove la segnalazione dipendente dal NO influisce su angiogenesi e migrazione cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDAH I (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DDAH1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DDAH1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DDAH1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDAH I.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DDAH1 per lo studio della segnalazione di DDAH I, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DDAH1 critici per la funzione di DDAH I
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DDAH1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDAH I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DDAH I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DDAH1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDAH I Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DDAH I (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DDAH1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DDAH1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.