Plásmido Doble Nickase (h) Cytokeratin 7: sc-400628-NIC

KRT7 codifica la citoqueratina 7, una proteína de filamentos intermedios de tipo II que forma heteropolímeros obligatorios con queratinas de tipo I para construir la red del citoesqueleto de muchos epitelios simples. La citoqueratina 7 contribuye a la arquitectura de las células epiteliales, a su resistencia mecánica y a su polaridad al sostener la organización de las uniones y coordinar el diálogo cruzado del citoesqueleto durante la diferenciación y las respuestas al estrés. Los patrones alterados de expresión de KRT7 se evalúan con frecuencia en estudios sobre la identidad de linaje epitelial y la remodelación, incluidos procesos vinculados a la migración celular y la integridad tisular. La desregulación de las redes de queratinas puede influir en la homeostasis epitelial y se examina habitualmente en biología tumoral y en modelos de lesión inflamatoria como marcador de cambios en el estado epitelial.

Cytokeratin 7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KRT7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KRT7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KRT7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KRT7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.