Cytokeratin 17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402008-ACT

KRT17 codifica a citoqueratina 17, uma proteína de filamento intermediário do tipo I que se monta com queratinas parceiras para sustentar a integridade estrutural das células epiteliais e a sua resiliência sob stress mecânico. A citoqueratina 17 é regulada de forma dinâmica durante a reparação de feridas e em estados hiperproliferativos, ligando a remodelação do citoesqueleto a processos como a ativação de queratinócitos, a migração celular e a diferenciação epitelial. Alterações na expressão de KRT17 têm sido relatadas em contextos inflamatórios e neoplásicos, nos quais é frequentemente utilizada como marcador de fenótipos epiteliais do tipo basal (basal-like) ou ativados. Como parte da rede de filamentos intermediários, interage com programas de sinalização que coordenam a organização do citoesqueleto, as respostas ao stress celular e a homeostase tecidular.

Cytokeratin 17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRT17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cytokeratin 17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRT17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRT17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cytokeratin 17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRT17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cytokeratin 17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cytokeratin 17 em células tumorais com expressão de KRT17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.