cytoglobin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402949

Descripción general

CYGB codifica la citoglobina, una globina hexacoordinada expresada en múltiples tejidos que se une al oxígeno y al óxido nítrico y contribuye al equilibrio redox celular. La citoglobina se ha implicado en la protección frente al estrés oxidativo y nitrosativo, influyendo en la señalización sensible a la hipoxia, el manejo de las especies reactivas de oxígeno y el metabolismo del óxido nítrico. A través de estos procesos, CYGB se ha relacionado con la regulación de la activación de fibroblastos, la función vascular y la adaptación celular a microambientes con bajo oxígeno. Se han descrito alteraciones en la expresión de CYGB en contextos relevantes para la biología tumoral, el estrés inflamatorio y la fibrosis de órganos, lo que respalda su uso como diana mecanística en estudios de vías y fenotipos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cytoglobin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYGB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYGB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYGB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cytoglobin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYGB para la investigación de la señalización de cytoglobin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYGB críticos para la función de cytoglobin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYGB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cytoglobin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido cytoglobin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYGB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cytoglobin (h) y el plásmido HDR cytoglobin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYGB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYGB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.