Plásmido Doble Nickase (h) CYP8B1: sc-403383-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CYP8B1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CYP8B1 (h) y el plásmido de doble nickasa CYP8B1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CYP8B1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CYP8B1 Anticuerpo (M15-P3B7): sc-101387
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CYP8B1 | sc-403383-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CYP8B1 | sc-403383-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP8B1 codifica la 12α-hidroxilasa de esteroles, una enzima microsomal del citocromo P450 que cataliza un paso clave de hidroxilación en la vía clásica de biosíntesis de ácidos biliares, influyendo en la proporción de ácido cólico respecto al ácido quenodesoxicólico. A través de esta actividad, CYP8B1 contribuye a configurar el pool hepático de ácidos biliares, afectando así la circulación enterohepática, la absorción de lípidos y la señalización metabólica mediante receptores nucleares sensibles a ácidos biliares y vías de GPCR como FXR y TGR5. La alteración de la expresión o la actividad de CYP8B1 se ha asociado con una composición de ácidos biliares desregulada y con fenotipos metabólicos más amplios relevantes para la investigación hepática y cardiometabólica. Por lo tanto, CYP8B1 es un objetivo útil para estudios mecanísticos del metabolismo hepático, las redes de señalización de ácidos biliares y las interacciones gen–ambiente en hepatocitos y sistemas modelo pertinentes.
CYP8B1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CYP8B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CYP8B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CYP8B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CYP8B1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.