CYP8B1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403383-ACT

ヒトCYP8B1は、胆汁酸組成を規定するミクロソーム局在のシトクロムP450酵素であるステロール12α-ヒドロキシラーゼをコードし、コール酸合成に必須の重要な水酸化反応段階を触媒します。古典的胆汁酸生合成経路における役割を通じて、CYP8B1はコール酸／ケノデオキシコール酸比に影響し、その結果として肝臓におけるコレステロール代謝回転、腸管での脂質吸収、ならびに胆汁酸を介したシグナル伝達を調節します。CYP8B1活性は、FXRなどの核内受容体経路や、胆汁酸輸送およびフィードバック制御を司る関連転写プログラムとのクロストークを介して、代謝恒常性と機能的に結び付いています。CYP8B1の発現変化や胆汁酸プロファイルの変動は、脂質異常症、インスリン抵抗性、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆汁うっ滞性の肝表現型と関連することが報告されており、肝胆道代謝の機序研究における有用な解析ノードとなっています。

CYP8B1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP8B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP8B1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP8B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP8B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP8B1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP8B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP8B1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP8B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP8B1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。