Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2A6 (h): sc-403448

Présentation

CYP2A6 code une monooxygénase humaine du cytochrome P450 qui catalyse le métabolisme oxydatif d’un large éventail de xénobiotiques ainsi que de certains substrats endogènes sélectionnés, contribuant à l’homéostasie chimique cellulaire et à l’équilibre rédox. En tant qu’hémoprotéine localisée au réticulum endoplasmique, CYP2A6 agit dans les voies de métabolisme des médicaments de phase I et coopère avec la NADPH–cytochrome P450 réductase afin d’assurer le transfert d’électrons lors de l’oxydation des substrats. Les variations d’expression ou d’activité de CYP2A6 peuvent modifier les flux métaboliques et influencer la sensibilité à la toxicité induite par des composés chimiques ainsi qu’à l’activation de carcinogènes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la diversité pharmacogénomique et des mécanismes de maladies liés aux expositions. Son enrichissement hépatique et sa régulation inductible permettent également d’explorer le contrôle transcriptionnel, la stabilité enzymatique et les réponses adaptatives aux substances chimiques environnementales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYP2A6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CYP2A6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CYP2A6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CYP2A6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYP2A6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CYP2A6 pour l'étude de la signalisation de CYP2A6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CYP2A6 essentiels à la fonction de CYP2A6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CYP2A6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYP2A6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CYP2A6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CYP2A6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYP2A6 plasmide HDR (h) et le CYP2A6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CYP2A6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CYP2A6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.