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cyclin FCRISPR激活质粒(h) | sc-401505-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 **CCNF** 基因编码 **Cyclin F(细胞周期蛋白F)**,这是一种 **F-box 蛋白**,作为 **SCF(Cyclin F)E3 泛素连接酶复合物**的底物识别组分,将细胞周期推进与蛋白质稳态(proteostasis)联系起来。Cyclin F 通过调控关键因子的**泛素依赖性降解**来发挥作用,这些关键因子参与 DNA 复制许可、中心体生物学以及基因组完整性维持,从而协调 S/G2 转换相关事件并抑制复制应激。借助这些功能,CCNF 与 DNA 损伤应答、泛素信号传导以及细胞周期检查点调控等通路发生交互。Cyclin F 介导的底物泛素化一旦失调,常与基因组维护异常相关,并已在增殖性疾病与神经退行性变的研究背景中得到关注。
cyclin F CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CCNF的表达。
cyclin F CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CCNF基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CCNF转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性cyclin F表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CCNF位点,并能够研究内源性位点上依赖于cyclin F的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CCNF表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟cyclin F通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。