cyclin C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402308

Panoramica

CCNC codifica per la ciclina C, una ciclina conservata che si associa principalmente a CDK8 e a chinasi correlate all’interno del complesso Mediator per modulare la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II. Attraverso la segnalazione della chinasi di Mediator, la ciclina C contribuisce a integrare segnali provenienti da MAPK, Wnt/β-catenina e da altre vie sensibili allo stress, coordinando il controllo del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e le risposte trascrizionali adattative. La ciclina C è stata inoltre collegata alla dinamica mitocondriale e alla segnalazione dello stress ossidativo, a testimonianza del suo ruolo all’interfaccia tra trascrizione nucleare e omeostasi cellulare. La deregolazione del controllo trascrizionale mediato da CCNC è stata associata ad alterazioni della proliferazione e dei programmi di espressione genica osservate nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da segnalazione aberrante e risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cyclin C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCNC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCNC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCNC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cyclin C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCNC per lo studio della segnalazione di cyclin C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCNC critici per la funzione di cyclin C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCNC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cyclin C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cyclin C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCNC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cyclin C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cyclin C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCNC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCNC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.