Plasmide Double Nickase (h) CXCR-3: sc-401933-NIC

CXCR3 code pour CXCR-3, un récepteur de chimiokines couplé aux protéines G qui se lie à des ligands inductibles par l’interféron, notamment CXCL9, CXCL10 et CXCL11, afin d’orienter la chimiotaxie des leucocytes. Lors de son activation, CXCR-3 se couple principalement à la signalisation Gi pour réguler les flux de calcium, les voies PI3K/AKT et MAPK, l’activation des intégrines et le remodelage du cytosquelette, qui contrôlent la migration cellulaire et le recrutement tissulaire. CXCR-3 constitue un nœud clé des circuits inflammatoires pilotés par les interférons de type I/II, en modulant la polarisation Th1 et le trafic des lymphocytes T activés et des cellules NK. Une signalisation CXCR3 dérégulée a été associée à des affections inflammatoires chroniques et auto-immunes, à des réponses immunitaires liées à la transplantation et à la dynamique du microenvironnement immunitaire tumoral.

CXCR-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CXCR3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CXCR3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CXCR3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CXCR3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.