CUL-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402370-NIC

O gene humano **CUL2** codifica a cullina-2 (CUL-2), um arcabouço central dos complexos de ligase de ubiquitina E3 do tipo **CUL2-RING**, que conectam módulos de reconhecimento de substratos, como **VHL** ou proteínas com **SOCS-box**, à transferência de ubiquitina mediada por **RBX1**. Esses complexos regulam a proteostase ao direcionar proteínas específicas para ubiquitinação e degradação pelo proteassoma, moldando vias que incluem o sensoriamento de oxigênio e a sinalização do fator induzível por hipóxia (**HIF**), a progressão do ciclo celular e respostas a danos no DNA. Por meio de seu papel na degradação dependente de VHL de **HIF-α** e de outros substratos, a CUL-2 ajuda a coordenar a adaptação celular à disponibilidade de oxigênio e ao estado metabólico. A desregulação de redes de ubiquitinação dependentes de CUL2 tem sido associada à sinalização oncogênica, a respostas alteradas à hipóxia e a defeitos de estabilidade genômica relevantes para a biologia do câncer.

CUL-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CUL2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CUL2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CUL2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CUL2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.