CUG-BP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403267

Übersicht

CELF2 (CUG-BP2) ist ein RNA-bindendes Protein der CELF-Familie, das die posttranskriptionelle Genregulation koordiniert, indem es alternatives Spleißen, mRNA-Stabilität und Translation über eine Vielzahl von Transkripten hinweg steuert. Es trägt dazu bei, die RNA-Prozessierung mit Signalinputs während der Zelldifferenzierung und bei Stressantworten zu koppeln, und beeinflusst dabei Netzwerke, die an der Organisation des Zytoskeletts, der Zellzyklus-Kontrolle und der Apoptose beteiligt sind. CELF2-abhängige RNA-Programme tragen zur gewebespezifischen Auswahl von Transkript-Isoformen bei und werden häufig im Kontext der Aktivierung von Immunzellen sowie der Entwicklungsregulation von Genen untersucht. Eine fehlregulierte CELF2-Aktivität wurde mit veränderten Spleißlandschaften in neuromuskulären sowie krebsbezogenen Modellen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zu seinen RNA-Zielmolekülen und regulatorischen Partnern motiviert.

Das CUG-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CELF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CELF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CELF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CUG-BP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CELF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CUG-BP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CELF2-Exone abzielen, die für die CUG-BP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CELF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CUG-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CUG-BP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CELF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CUG-BP2 HDR-Plasmid (h) und CUG-BP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CELF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CELF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.