Plásmido CRISPR de Activación (h) CstF-77: sc-404038-ACT

CSTF3 codifica la subunidad de 77 kDa del factor estimulador de corte (CstF-77), un componente central de la maquinaria de procesamiento del extremo 3′ del pre-ARNm que acopla el corte y la poliadenilación con la terminación de la transcripción. Al coordinar el reconocimiento de las señales de poli(A) con otros factores de CPA, CstF-77 ayuda a modular la estabilidad del transcrito, la exportación nuclear y la producción proteica mediante la poliadenilación alternativa y el control de la longitud de la UTR 3′. Las alteraciones en la dosis o la actividad de los factores de CPA pueden desplazar la selección global de sitios de poli(A) y reprogramar redes de expresión génica que regulan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. En consecuencia, CSTF3 se estudia con frecuencia en el contexto de la desregulación del procesamiento de ARN y sus asociaciones con estados transcripcionales oncogénicos y anomalías más amplias de la expresión génica.

CstF-77 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CSTF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CstF-77 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CSTF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CSTF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CstF-77. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CSTF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CstF-77 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CstF-77 en células tumorales con expresión de CSTF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.