Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CSN8 Plasmide Double Nickase (m): sc-430844-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CSN8 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CSN8 Double Nickase Plasmid (m) e il CSN8 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cops8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CSN8 Antibody (C-9): sc-514088
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CSN8 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430844-NIC | 20 µg | $410.00 |
Cops8 codifica CSN8, una subunità centrale del signalosoma COP9 che regola l’attività delle ubiquitin ligasi cullin–RING attraverso la deneddilazione, modulando così il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Controllando la stabilità di regolatori del ciclo cellulare, fattori della risposta al danno al DNA e intermedi della segnalazione, CSN8 contribuisce a coordinare la proteostasi, le risposte allo stress e i programmi trascrizionali. Nei sistemi murini, l’alterazione della funzione del signalosoma COP9 è stata associata a un’omeostasi dello sviluppo modificata e a difetti specifici di tessuto, riflettendo effetti ampi su proliferazione e apoptosi. Questi ruoli rendono Cops8 un nodo utile per studiare il crosstalk tra la via ubiquitina–proteasoma e reti di segnalazione come MAPK e NF-κB.
CSN8 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cops8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cops8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cops8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cops8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.