CSN8 Plasmide Double Nickase (h): sc-409800-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CSN8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CSN8 Double Nickase Plasmid (h) e il CSN8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COPS8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CSN8 Antibody (F-8): sc-393482
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CSN8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-409800-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CSN8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-409800-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COPS8 codifica CSN8, un componente centrale del signalosoma COP9 (CSN) che regola le ligasi E3 ubiquitina cullin-RING controllando la dinamica di neddilazione/deneddilazione delle culline. Modulando la proteostasi dipendente dall’ubiquitina, CSN8 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e le vie di trasduzione del segnale che dipendono dal ricambio tempestivo di proteine regolatorie chiave. La funzione di CSN8 interseca l’attività del sistema ubiquitina–proteasoma e programmi adattativi allo stress come l’autofagia, plasmando l’omeostasi cellulare in stati proliferativi e differenziati. La disregolazione delle subunità del signalosoma COP9, inclusa un’alterata espressione di COPS8 o una perturbazione dell’integrità del CSN, è stata associata a un controllo anomalo della crescita e a cambiamenti, rilevanti per la patologia, nella stabilità del proteoma nelle cellule umane.
CSN8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COPS8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COPS8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COPS8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COPS8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.