Plásmido CRISPR de Activación (h) CRSP70: sc-402381-ACT

MED26 codifica CRSP70, una subunidad central del complejo Mediator que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II y ayuda a coordinar el inicio de la transcripción con la elongación. Al interactuar con el módulo CDK8 y el complejo de superelongación, MED26 contribuye a la liberación de la pausa proximal al promotor y a la regulación dinámica de programas de expresión génica implicados en la identidad celular y las respuestas al estrés. La alteración de la función de Mediator, incluida la desregulación de redes transcripcionales asociadas a MED26, es relevante en estudios de trastornos del desarrollo y de la reprogramación transcripcional asociada al cáncer. Como regulador nuclear de la transcripción por Pol II, CRSP70 se examina con frecuencia en análisis a nivel de rutas de comunicación entre potenciador y promotor, control génico dependiente de la cromatina y acoplamiento específico del contexto entre señalización y transcripción.

CRSP70 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MED26 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRSP70 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MED26 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MED26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRSP70. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MED26 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRSP70 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRSP70 en células tumorales con expresión de MED26 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.