Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRF (h): sc-400770

Présentation

La corticotropin-releasing hormone (CRH) code le neuropeptide CRF, un régulateur central de l’axe hypothalamo–hypophyso–surrénalien (HHS), qui coordonne les réponses endocriniennes, autonomes et comportementales au stress physiologique. Après sa sécrétion, le CRF transmet principalement son signal via CRHR1/CRHR2 afin d’activer les voies Gs–adénylate cyclase–cAMP/PKA, modulant la transcription dépendante de CREB et les effets neuroendocriniens en aval, notamment la libération d’ACTH. L’activité CRH/CRF s’articule également avec les signalisations inflammatoires et métaboliques, influençant la production de cytokines et l’homéostasie énergétique dans le cerveau et les tissus périphériques. Une expression dérégulée de la CRH ou une signalisation anormale des récepteurs du CRF a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques liés au stress ainsi qu’à des troubles inflammatoires et gastro-intestinaux, ce qui en fait une cible pertinente pour les études mécanistiques du dialogue entre stress et système immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CRH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CRH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CRH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CRH pour l'étude de la signalisation de CRF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CRH essentiels à la fonction de CRF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CRH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CRH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRF plasmide HDR (h) et le CRF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CRH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CRH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.