CRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400770

Übersicht

Das Corticotropin-Releasing-Hormon (CRH) kodiert das Neuropeptid CRF, einen zentralen Regulator der Hypothalamus-Hypophysen-Nebennierenrinden-(HPA)-Achse, die endokrine, autonome und verhaltensbezogene Reaktionen auf physiologischen Stress koordiniert. Nach der Sekretion signalisiert CRF vor allem über CRHR1/CRHR2 und aktiviert Gs–Adenylylcyclase–cAMP/PKA-Signalwege, wodurch die CREB-abhängige Transkription und nachgeschaltete neuroendokrine Effekte einschließlich der ACTH-Freisetzung moduliert werden. Die CRH/CRF-Aktivität ist zudem mit entzündungs- und stoffwechselbezogenen Signalwegen verknüpft und beeinflusst die Zytokinproduktion sowie die Energiehomöostase in Gehirn und peripheren Geweben. Eine dysregulierte CRH-Expression oder eine gestörte Signalübertragung über CRF-Rezeptoren wurde mit stressassoziierten neuropsychiatrischen Phänotypen sowie mit entzündlichen und gastrointestinalen Erkrankungen in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Untersuchungen des Stress-Immunsystem-Crosstalk relevant.

Das CRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CRH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CRH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CRH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CRF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CRH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CRF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CRH-Exone abzielen, die für die CRF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CRH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CRF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CRH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CRF HDR-Plasmid (h) und CRF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CRH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CRH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.