CREST Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403134-ACT

SS18L1 (CREST) codifica um fator associado à cromatina, enriquecido em neurônios, que interage com a regulação da transcrição e com programas de expressão gênica dependentes de atividade. O CREST coopera com a maquinaria de remodelamento de cromatina, incluindo complexos relacionados ao SWI/SNF, para modular o estado de promotores e enhancers que influenciam a diferenciação neuronal, o crescimento de neuritos e a função sináptica. Por meio desses mecanismos epigenéticos, o SS18L1 conecta a sinalização neuronal a alterações de longo prazo em redes transcricionais e na identidade celular. A desregulação de vias associadas ao CREST tem sido investigada no contexto de processos relacionados a doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, incluindo homeostase sináptica alterada e transcrição responsiva ao estresse.

CREST O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SS18L1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CREST O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SS18L1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SS18L1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CREST. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SS18L1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CREST no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CREST em células tumorais com expressão de SS18L1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.