Plásmido Doble Nickase (h) CPS2: sc-403519-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CPS2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CPS2 (h) y el plásmido de doble nickasa CPS2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CAD. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CPS2 Anticuerpo (F-6): sc-376072
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CPS2 | sc-403519-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CPS2 | sc-403519-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La CAD humana codifica una enzima citosólica multifuncional que cataliza las tres primeras reacciones comprometidas de la biosíntesis de pirimidinas de novo, y el dominio CPS2 media la síntesis de fosfato de carbamoilo dependiente de glutamina. Al acoplar la actividad de la carbamoil-fosfato sintetasa con las funciones de aspartato transcarbamilasa y dihidroorotasa dentro de un único polipéptido, CAD sostiene la producción de nucleótidos necesaria para la replicación del ADN, la transcripción del ARN y la síntesis de fosfolípidos de membrana. La actividad de CAD se coordina con las señales proliferativas y el estado metabólico celular, vinculando la disponibilidad de pirimidinas con la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés. La desregulación del metabolismo de las pirimidinas y la alteración de la función de CAD se han asociado con fenotipos proliferativos y vulnerabilidad metabólica en modelos relevantes para el cáncer, lo que convierte a CAD en un nodo útil para estudiar la homeostasis de nucleótidos.
CPS2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAD en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAD. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAD. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAD alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.