Plasmide Double Nickase (m) Cox-2: sc-422489-NIC

Le gène murin *Ptgs2* code la cyclooxygénase-2 (Cox-2), une enzyme inductible et limitante de la vitesse qui convertit l’acide arachidonique en prostaglandine H2, alimentant la production de prostanoïdes en aval tels que la PGE2, lesquels modulent le tonus vasculaire, la sensibilisation à la douleur et le comportement des cellules immunitaires. L’expression de Cox-2 est rapidement augmentée par des signaux inflammatoires, notamment via les voies NF-κB et MAPK activées en aval des cytokines et des récepteurs de type Toll, reliant l’activation de l’immunité innée à la biosynthèse des médiateurs lipidiques. Par son impact sur la signalisation des prostaglandines, Cox-2 influence le recrutement des leucocytes, la production de cytokines, l’angiogenèse et le remodelage tissulaire. Une activité dérégulée de *Ptgs2* est largement étudiée dans des modèles d’inflammation chronique, de microenvironnements favorisant les tumeurs, ainsi que dans des contextes de neuroinflammation et de stress métabolique.

Cox-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ptgs2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ptgs2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ptgs2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ptgs2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.