COPG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404407-ACT

COPG1 codifica a subunidade COPG do complexo coatômero COPI, um mediador-chave do transporte vesicular entre o aparelho de Golgi e o retículo endoplasmático e no interior das cisternas do Golgi. A COPG participa da montagem do revestimento (coat) e da seleção de carga necessárias para o tráfego retrógrado, a manutenção da organização do Golgi e a proteostase, ligando-a às respostas ao estresse celular e à homeostase da via secretória. A perturbação do tráfego dependente de COPI pode alterar a reciclagem de receptores, o processamento de lipídios e a glicosilação — processos que influenciam o crescimento celular e redes de sinalização. O transporte vesicular desregulado e a dinâmica Golgi/RE são frequentemente implicados na biologia do câncer, na neurodegeneração e na função de células imunes, tornando o COPG1 um alvo relevante para estudos mecanísticos de vias de tráfego de membranas.

COPG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COPG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COPG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COPG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COPG em células tumorais com expressão de COPG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.