20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
El Plásmdo de Activación CRISPR (h) connexin 36 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) connexin 36 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR connexin 36 (h) y el plásmido de activación CRISPR connexin 36 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de GJD2. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: connexin 36 Anticuerpo (H-9): sc-398063