COL7A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401235-NIC

COL7A1 は VII 型コラーゲン（COL7A1）をコードしており、これは表皮基底膜をその下の真皮に固定し、皮膚の恒常性（健全性）を支えるアンカリングフィブリルの主要な構造要素です。この細胞外マトリクスタンパク質は、ラミニン、IV 型コラーゲン、その他の真皮–表皮接合部タンパク質との相互作用を介して、基底膜の組み立てと安定化に寄与し、マトリクスの組織化を細胞–マトリクス接着およびメカノトランスダクション（機械刺激の情報伝達）と結び付けています。COL7A1 機能の破綻は、栄養障害型表皮水疱症をはじめとする遺伝性の皮膚脆弱性表現型と強く関連しており、上皮生物学やマトリクスリモデリングの研究において広く解析されている遺伝子座です。さらに COL7A1 は、ヒト細胞モデルにおける創傷修復過程、ケラチノサイト–線維芽細胞間のクロストーク、ならびに細胞外マトリクス動態を調べるための分子レベルの切り口としても用いられています。

COL7A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL7A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL7A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL7A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL7A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。