COL6A3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402899-NIC

ヒトCOL6A3はVI型コラーゲンのα3鎖をコードしており、組織の引張強度やメカノトランスダクションを支える微小線維状ネットワークへと組み立てられる、主要な細胞外マトリックス（ECM）構成成分です。COL6A3は、細胞‐マトリックス接着やマトリックス構造の形成に寄与するとともに、インテグリンおよびTGF-β関連シグナル伝達経路とのクロストークを介して、線維芽細胞の活性化、筋形成、間質リモデリングに影響を与えます。COL6A3の発現やマトリックスへの沈着の変化は結合組織および神経筋系の表現型と関連し、ECM組成が細胞移動や分化を規定することから、線維化や腫瘍微小環境の生物学においてもしばしば研究対象となります。強い文脈依存性をもつマトリックス遺伝子として、COL6A3はECM駆動の細胞挙動変化を解析するために、3D培養、オルガノイド、共培養系で一般的に検討されます。

COL6A3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における COL6A3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、COL6A3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、COL6A3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、COL6A3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。