COL4A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401792-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL4A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL4A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL4A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL4A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COL4A1 Antibody (5E10): sc-517572
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL4A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401792-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401792-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A1 codifica la catena alfa-1 del collagene di tipo IV, un componente strutturale fondamentale delle membrane basali che, insieme a COL4A2, si assembla in reti di collagene IV per sostenere l’integrità dei tessuti e la stabilità del microcircolo. Questa impalcatura della matrice extracellulare contribuisce a organizzare le interazioni cellula–matrice che determinano la polarità epiteliale ed endoteliale, regolano la permeabilità e influenzano la meccanotrasduzione tramite segnali mediati da integrine. La funzione di COL4A1 si intreccia con l’assemblaggio della membrana basale, l’organizzazione della matrice extracellulare e programmi angiogenici che incidono sulla maturazione dei vasi e sull’omeostasi tissutale. La disregolazione o la presenza di varianti patogene in COL4A1 è associata a patologie dei piccoli vasi e a difetti multisistemici della membrana basale, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della biologia vascolare, della funzione di barriera e dei fenotipi cellulari dipendenti dalla matrice.
COL4A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL4A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL4A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL4A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL4A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.