COL1A2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400598

Descripción general

COL1A2 codifica la cadena pro-α2 del colágeno tipo I, un colágeno fibrilar principal que se ensambla en heterotrímeros y aporta resistencia a la tracción a los tejidos conectivos. Tras su secreción y el procesamiento extracelular, el colágeno tipo I se incorpora a la matriz extracelular (MEC), donde regula la arquitectura tisular y la mecanotransducción mediante señalización dependiente de integrinas y de los receptores con dominio discoidina (DDR). La expresión de COL1A2 y la fibrilogénesis del colágeno se interconectan con vías de remodelación de la MEC, incluidas la señalización de TGF-β, la actividad de las metaloproteinasas de matriz y los programas de activación de fibroblastos. La desregulación de COL1A2 contribuye a cambios en la rigidez de la matriz y a una deposición anómala de colágeno, y se ha implicado tanto en trastornos hereditarios del tejido conectivo como en contextos de remodelación fibrótica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL1A2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL1A2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL1A2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL1A2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL1A2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL1A2 para la investigación de la señalización de COL1A2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COL1A2 críticos para la función de COL1A2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL1A2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL1A2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL1A2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL1A2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL1A2 (h) y el plásmido HDR COL1A2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL1A2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL1A2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.