Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL18A1 (h): sc-402281

Présentation

COL18A1 code le collagène XVIII, un collagène multiplexine associé à la membrane basale qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire et à la compartimentation des tissus. Le clivage protéolytique de sa région C-terminale génère l’endostatine, un fragment bioactif qui module le comportement des cellules endothéliales et la signalisation angiogénique via des interactions avec les protéoglycanes à héparane sulfate et les intégrines. Par ses rôles dans l’intégrité de la membrane basale et l’homéostasie vasculaire, COL18A1 influence l’adhésion et la migration cellulaires ainsi que les signaux du microenvironnement qui façonnent le développement et le remodelage lors de la cicatrisation. Les altérations génétiques de COL18A1 sont associées à des phénotypes développementaux et oculaires et sont fréquemment étudiées dans le contexte de l’angiogenèse, de la fibrose et de la biologie du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL18A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL18A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL18A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL18A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL18A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL18A1 pour l'étude de la signalisation de COL18A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL18A1 essentiels à la fonction de COL18A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL18A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL18A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL18A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL18A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL18A1 plasmide HDR (h) et le COL18A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL18A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL18A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.