COL12A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402361-NIC

Il gene umano **COL12A1** codifica la catena alfa 1 del collagene di tipo XII, un collagene associato alle fibrille che si localizza nella matrice extracellulare e interagisce con fibrille contenenti collagene I per regolare l’architettura della matrice, le proprietà di resistenza alla trazione e la comunicazione cellula–matrice. Attraverso i suoi ruoli nella fibrillogenesi del collagene, nell’organizzazione dei tessuti e nella meccanotrasduzione, COL12A1 contribuisce all’accoppiamento con il citoscheletro e a vie di segnalazione che modellano i programmi di adesione e migrazione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di COL12A1 sono state collegate a malattie ereditarie del tessuto connettivo e a fenotipi che interessano l’integrità muscolare e scheletrica, rendendolo rilevante per studi sul rimodellamento della matrice e sulla biologia dello sviluppo. Nella ricerca su cancro e fibrosi, COL12A1 viene spesso analizzato come parte di firme stromali della matrice extracellulare associate a cambiamenti della rigidità tissutale e del comportamento invasivo.

COL12A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL12A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL12A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL12A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL12A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.