COG7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409352

Übersicht

COG7 kodiert eine zentrale Untereinheit des konservierten oligomeren Golgi-(COG)-Tethering-Komplexes, der den retrograden vesikulären Transport innerhalb des Golgi-Apparats unterstützt, der für die Aufrechterhaltung der Golgi-Architektur und die korrekte Enzymlokalisierung erforderlich ist. Durch die Koordination von Vesikelerfassung und -fusion mit Golgi-Membranen trägt COG7 dazu bei, die ordnungsgemäße Prozessierung und Sortierung sekretorischer und membranständiger Proteine sicherzustellen, einschließlich glykosylierungsabhängiger Reifungsschritte. Eine Störung der COG7-Funktion beeinträchtigt die Golgi-Homöostase und kann zu weitreichenden Defekten in der Proteinglykosylierung und im Proteintransport führen – Prozesse, die für die Regulation von Zelloberflächenrezeptoren, Sekretion und die Kommunikation zwischen Organellen zentral sind. Varianten in COG7 wurden mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen (Congenital Disorders of Glycosylation, CDG) in Verbindung gebracht, was die Bedeutung des Gens für die Erforschung der Glykoproteinbiosynthese und Golgi-assoziierter Krankheitsmechanismen unterstreicht.

Das COG7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COG7-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COG7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COG7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COG7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COG7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COG7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COG7-Exone abzielen, die für die COG7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COG7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COG7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COG7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COG7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COG7 HDR-Plasmid (h) und COG7 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COG7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COG7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.